Главная Обратная связь

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






Учтите и оцените результаты непрямой гемагглютинации (РНГА или РПГА)



Леч., пед ф-ты 2006

ЗАНЯТИЕ 10

 

Тема: Реакции иммунитета: реакция агглютинации, реакция преципитации.

Цель: Изучить реакции иммунитета: реакцию агглютинации (РА), реакцию преципитации (РП).

Знать:

1. Понятие иммунитет, его виды.

2. Антигены, их свойства; антигены микробной клетки.

3. Антитела, их свойства.

4. Сущность серологических реакций, их виды и практическое использование.

Уметь:

1. Поставить, учесть и оценить результаты РА на стекле, РА в развернутом ряду.

2. Учесть и оценить результаты РНГА.

3. Поставить, учесть и оценить реакцию кольцепреципитации по Асколи.

4. Учесть и оценить результаты РП в геле.

Контрольные вопросы:

1. Понятие иммунитет, его виды.

2. Антигены, их характеристика.

3. Антигены микробной клетки.

4. Антитела, классы иммуноглобулинов, их характеристика.

5. Понятие серологической реакции и ее практическое использование.

6. Реакция агглютинации и методы ее постановки.

7. Реакция преципитации, ее виды и практическое применение.

8. Получение агглютинирующих и преципитирующих сывороток и их применение.

9. Получение диагностикумов и их применение.

 

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Поставить, учесть и оценить результаты развернутой РА с сывороткой обследуемого с подозрением на брюшной тиф и брюшно-тифозным диагностикумом.

2. Поставить, учесть и оценить результаты РА на стекле с исследуемой культурой и агглютинирующей адсорбированной сывороткой Shigella sonnei.

3. Учесть и оценить результаты РНГА с сыворотками обследуемых с подозрением на бактерионосительство возбудителя брюшного тифа и Vi-эритроцитарным диагностикумом.

4. Поставить, учесть и оценить результаты реакции термокольцепреципитации Асколи с преципитирующей сибиреязвенной сывороткой и термоэкстрактом из кожи овец, поступающей на обрабатывающее предприятие из районов неблагополучных по сибирской язве.

5. Учесть и оценить результаты РП в геле с антитоксической противодифтерийной сывороткой и исследуемыми дифтерийными культурами.

6. Биопрепараты: диагностикумы; агглютинирующие и преципитирующие диагностические сыворотки.

 

Методические указания к выполнению практического занятия:

Поставьте, учтите и оцените результаты реакции агглютинации (РА) на стекле.

Постановка: на обезжиренное стекло нанесите каплю диагностической сыворотки и каплю физ. раствора для контроля. В каждую каплю внесите петлей суточную культуру микроорганизмов и тщательно перемешайте, чтобы капли были равномерно мутными.



Учет: реакция учитывается в течение 5 мин. невооруженным глазом или с помощью лупы.

Контроль антигена - КА — равномерное помутнение (исключается спонтанная агглютинация).

Опыт - РА - положительная: появление хлопьев, хорошо видимых при покачивании предметного стекла.

Опыт — РА - отрицательная: жидкость остается равномерно мутной.

Оценка результатов: отсутствие спонтанной агглютинации в КА в случае положительной реакции светельствует о соответствии антигенов исследуемой культуры антителам агглютинирующей сыворотки и принадлежности культуры к соответствующему роду, виду, серогруппе или серовару.

Поставьте, учтите и оцените результаты развернутой реакции агглютинации (РА).

Постановка: ее проводят по схеме, представленной в таблице 1.

Таблица 1

Схема постановки РА.

Ингредиенты Разведения сыворотки КА КС
1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600
 
 
 
Изотонический раствор, мл

1 1 --
Сыворотка обследуемого 1:50, мл -- -- -- -- -- 1 (1:50)
 
Диагностикум, капли

--

 

Примечание: стрелкой обозначен перенос разведенной сыворотки из пробирки

в дез. раствор
в пробирку.

 

Учет: инкубация PA осуществляется при 37° С в течении 2 ч, затем при комнатной t° 18-20 ч.

Реакцию учитывают невооруженным глазом до встряхивания пробирок, а затем при их легком встряхивании пальцем правой руки. В сомнительных случаях используют агглютиноскоп или лупу. Опытные пробирки сравниваются с контролями:



КА - равномерное помутнение, исключается спонтанная агглютинация антигена. КС — содержимое прозрачное, отсутствие спонтанной агглютинации антител. При таких контролях результаты РА, положительные или отрицательные, будут достоверными.

Интенсивность реакции выражается плюсами:

++++ - реакция резко положительная; весь агглютинат на дне пробирки в виде зонтика, жидкость над ним прозрачная;

+++ - реакция положительная; осадок выражен, надосадочная жидкость слегка мутная;

++ - частичная агглютинация с небольшим осадком, надосадочная жидкость мутная;

+ - сомнительная агглютинация, жидкость мутная.

При отрицательной реакции — агглютинации нет, взвесь остается равномерно мутной и по виду неотличима от содержимого пробирки с контролем антигена. Титром РА считают максимальное разведение сыворотки с интенсивностью реакции не менее, чем ++.

Оценка результатов: для подтверждения или опровержения диагноза заболевания, полученный титр РА сопоставляют с диагностическим титром. Например: диагностический титр РА при брюшном тифе равен 1:100 у непривитых детей, 1:200 у непривитых взрослых.

Учтите и оцените результаты непрямой гемагглютинации (РНГА или РПГА).

Постановка: эритроциты, предварительно нагруженные (сенсибилизированные) антигеном или антителами – эритроцитарные диагностикумы вносят в лунки плексиглазовой панели, в которых приготовлены разведения сыворотки обследуемого или экстракты антигена.

Учет: результаты учитывают после часовой инкубации до 37° С. При отрицательном результате РНГА – эритроциты оседают в виде плотного диска; при положительном – оседают в виде зонтика с интенсивностью не меньше ++.

Достоверность результатов подтверждается контролями ингредиентов:

КЭ – контроль несенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации;

КА – контроль сенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации;

КС – контроль сыворотки обследуемого с добавлением несенсибизированных эритроцитов на отсутствие в ней неспецифических факторов агглютинации.

Оценка результатов: сопоставляют титр РНГА с диагностическим титром. Например, в РНГА с сальмонеллезным Vi-диагностикумом он равен 1:40.

 

Таблица 2.

Схема постановки РНГА.

 

Ингредиенты Разведения сыворотки   КЭ КД
1:10 1:20 1:40 1:80
Физ. раствор (1-я пипетка)

1 1
Сыворотка обследуемого 1:5 (1-я пипетка) -- -- -- - -
3% взвесь эритроцитов (2-я пипетка) - - - - -
Эритроцитарный диагностикум (2-я пипетка)

-

 

 

в дез. раствор

 


Эта страница нарушает авторские права

allrefrs.ru - 2018 год. Все права принадлежат их авторам!