Главная Обратная связь

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






Закрепление знаний, умений и навыков



И Н С Т Р У К Ц И Я

По выполнению практической работы № 44 по теме

«Обмен липидов. Количественное определение триацилглицеридов в сыворотке крови».

Цели занятия:

1. Закрепить теоретические знания по теме «Химия и обмен липидов».

2. Закрепить навыки и умения в приготовлении растворов и реактивов.

3. Провести биохимическое исследование – определение количества три-ацилглицеридов в сыворотке крови.

 

 

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Анаболические и катаболические процессы липидного обмена.

2. Роль лабораторной диагностики в исследовании липидного обмена пациента.

3. Локализацию липидов, механизм, реакции, ферменты синтеза ТАГ.

4. Классификацию липидов. Строение триглицеридов, фосфолипидов, хиломикронов. Биологическое значение отдельных классов.

5. Технику приготовления растворов и реактивов.

6. Технику дозирования, пипетирования растворов и реактивов для исследования.

7. Технику инкубирования проб.

8. Технику и меры предосторожности в работе на спектрофотометре.

 

Учащийся должен уметь:

1. Работать с химической посудой, пипетками, дозатором.

2. Работать с набором реактивов.

3. Работать с термостатом, спектрофотометром.

4. Приготовить рабочие реактивы, пользуясь набором реактивов.

5. Приготовить опытную, стандартную, контрольную пробы для определения биохимического показателя по предложенной методике.

6. Дать начальную интерпретацию полученному результату исследования.

 

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

 

1.1. Повторение теоретического материала по теме «Химия и обмен липидов».

1.2. Вводное слово преподавателя.

Нейтральные жиры включают в себя сложные эфиры глицерина и жирных кислот. Так как глицерин – это трёхатомный спирт, жирные кислоты могут образовывать сложноэфирные связи в трёх местах. Соответственно, в тканях организма встречаются моноацилглицерины, диацилглицерины и триацилглицериды. Существует много различных типов ТАГ, которые отличаются природой трёх остатков жирных кислот, присоединённых к глицерину сложно-эфирной связью. Простые ТАГ – во всех трёх положениях находятся остатки одной и той же жирной кислоты (например, тристеаринглицерин, трипальми-тоглицерин). Большинство нейтральных жиров в организме животных содержит в своём составе преимущественно остатки пальмитиновой, стеариновой, олеиновой и линолевой жирных кислот. При этом состав нейтрального жира из различных тканей одного и того же организма может существенно различаться. Так, подкожный жир человека более богат насыщенными жирными кислотами, чем жир печени, содержащий больше ненасыщенных жирных кислот.



Всё возрастающее распространение среди населения большинства развитых стран мира заболеваний, связанных с нарушением липидного обмена (атеросклероза, ожирения и некоторых других) с каждым годом заставляет уделять больше внимания их лабораторной диагностике.

Без исследования показателей липидного обмена весьма затруднительно составить объективное представление и о функциональной способности целого ряда жизненно важных органов (печени, почек и т.д.) при самых различных заболеваниях. Основным биологическим материалом для проведения биохимической диагностики нарушения состояния обмена жиров и жироподобных веществ является кровь больного. С целью диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, болезней печени и почек, а также нейроэндокринных расстройств в клинической практике производят определение общих липидов, триглицеридов, фосфолипидов, свободных жирных кислот, холестерина и его эфиров, липопротеидных фракций.

В последние годы в клинико-лабораторной практике всё более широко используются ферментные методы исследования триглицеридов – наиболее специфичные, исключительно точные и простые в исполнении. Для получения хорошо воспроизводимых результатов следует строго соблюдать условия проведения исследования и, прежде всего, время инкубации. Энзиматический колориметрический тест – определение триглицеридов, основывается на по-следовательном протекании четырёх ферментативных реакций, осуществляе-мых липопротеинлипазой (ЛПЛ), глицеролкиназой (ГК), глицеролфосфатокси-дазой (ГФО) и пероксидазой (ПОД):

ЛПЛ



триацилглицерид глицерол + жирные кислоты;

ГК

глицерол + аденозинтрифосфорная кислота глицерол-3-фосфат + АДФ;

ГФО

глицерол-3-фосфат + O2 дигидроксиацетонфосфат + H2O2;

ПОД

H2O2 + 4-аминофеназон + 4-хлорфенол производное хинонеимина + H2O

 

Технология энзиматически-колориметрического определения реализуется с применением наборов реагентов фирм «Абрис+», «Бекман» и др.

 

 

2. Указания к занятию:

2.1. Внимательно изучите инструкцию.

2.2. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

2.3. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, приборами.

2.4. Используйте резиновую грушу с переходником. Работайте в перчатках!

2.5. Соблюдайте дезинфекционный режим в работе!

 

 

Практическая часть.

3.1.Приготовление рабочего реагента.

 

Ход приготовления.

 

Смешать буфер и раствор ферментов в соотношении 9 : 1.

Рабочий реагент стабилен не менее 14 дней при температуре 2-8°C в герметично закрытом сосуде.

 

3.2.Лабораторная работа. Определение концентрации триглицеридов в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом.

ПРИНЦИП: Триглицериды под действием липазы гидролизуются до глицерина и жирных кислот. Глицерин под действием глицерокиназы и кислорода воздуха образует диоксиацетонфосфат и перекись водорода, которая под действием пероксидазы образует окрашенное в красный цвет соединение хинонеимин, концентрация которого пропорциональна концентрации триацилглицеридов в сыворотке (плазме) крови.

 

Оборудование и реактивы: штатив с пробирками, пипетки градуированные (1 мл; 0,01 мл); набор реактивов «Абрис+», термостат; спектрофотометр; химические стаканы; дезинфицирующий раствор 0,5% раствор Полидеза.

 

Проведение анализа.

Отмерить (мл) Опытная проба, мл Калибровочная проба, мл Холостая проба, мл
Рабочий реагент Сыворотка крови Дистилированная вода Стандартный раствор 1,0 0,01 - - 1,0 - - 0,01 1,0 - 0,01 -

Время инкубации – 10 минут при температуре 37°C или 15 минут при температуре 18-25°C. По окончании инкубации измерить оптическую плотность пробы (Епр.) и калибратора (Екал.) против холостой пробы при длине волны 500 нм, кювета – 10 мм. Стабильность окраски – не менее 1 часа после окончания инкубации.

 

Расчёт:

С = 2,29 ´ (Епр. / Екал.), ммоль/л.

 

Референтные пределы:

нормальные показатели: 0,15-1,71 ммоль/л;

пограничные показатели: 1,71-2,29 ммоль/л;

патологические показатели: свыше 2,29 ммоль/л.

 

 

Закрепление знаний, умений и навыков.

4.1.Выполнение лабораторной работы.

 

4.2.Учёт результатов.

 

 


Эта страница нарушает авторские права

allrefrs.ru - 2019 год. Все права принадлежат их авторам!