Главная Обратная связь Поможем написать вашу работу!

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






Для визначення загального холестерину в сироватці крові



ферментативним методом (метод Триндера)

Призначення

Набір застосовують для визначення вмісту загального холестерину всироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці. Кількість визначень: напівмакро - 95; мікро - 190. Набір призначений для використання ін вітро.

Обладнандія

  1. Пробірки ємністю 10 мл (ГОСТ 1770-74).

2. Піпетки ємністю: 2,0, 0,02, 0,01 мл (ГОСТ 29227-91).

3. Термостатичне обладнання для підтримування температури + 37,0°С.

4. Фотометричне обладнання, кювети: 5, 3 мм. Довжина хвилі 546(500-550) нм.

Вимоги до проби

1. Сироватка чи плазма (ЕДТО, гепарин) крові. Не потребує 12-годинного голодування, якщо необхідно визначити тільки холестерин. Відокремити сироватку від клітин протягом 2 годин. Стабільна 5-7 днів при температурі від + 2°С до + 10°С.

2. Гемоліз на результат аналізу не впливає до концентрації гемоглобіну 200 мг/дл. Вміст білірубіну до 5 мг/дл.

3. При концентрації холестерину > 25,8 ммоль/л, пробу розводять фізіологічним розчином, результат перемножують на коефіцієнт розведення.

4. Величина оптичної густини ензимного реагенту, при довжині хвилі 546 нм проти води не повинна перевищувати 0,15.

Принцип методу

Етерефікований холестерин під впливом холестеролестерази розщепляється до вільного холестерину та жирних кислот. Холестерин під впливом холестеролоксидази в присутності кисню окислюється в холестенон з попутнім утворенням молекул перекису водня. Останній вступає в реакцію з 4-амінофеназоном та фенолом з утворенням забарвленого в рожево-червоний хіноніміна, інтенсивність забарвлення якого пропорційна концентрації загального холестерину.

 

Компоненти Напівмакро
Д К X
Сироватка Калібратор Ензимний реагент 0,02 - 2,00 - 0,02 2,00 - - 2,00
Перемішують. Інкубують 30 хв при температурі + 37,0°С. Вимірюють оптичну густину дослідної та калібрувальної проби проти и холостої проби. Стабільність забарвлення - 1 година.

Розрахунок



Вміст загального холестерину розраховують за формулою:

, (4,7 ммоль/л).

-

Норма

До 30років 0,3 -4,7 ммоль/л

Після 30 років 0,3-5,2 ммоль/л

Застережні заходи

1. Фенол (ензимний реагент) - отруйна речовина.

2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом. У всіх випадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.

Література

Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторна діагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».

ІНСТРУКЦІЯ

Для визначення тригліцеридів в сироватці крові

Колориметричним методом Флетчера

Призначення

Набір застосовують для визначення вмісту тригліцеридів в сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці.

Кількість визначень: напівмакро - 50.

Набір призначений для використання ін вітро.

Обладнання

1. Пробірки ємністю 10 мл (ГОСТ 1770-74).

2. Піпетки ємністю: 5,0, 1,0, 0,1 мл (ГОСТ 29227-91).

3. Мірна ложка для адсорбенту (0,4 г).

4. Струшувач.

5. Центрифуга тип ОПН-3 (3000 об/хв).

6. Термостатичне обладнання для підтримування температури + 60°С. 7. Фотометричне обладнання, кювети 5 мм. Довжина хвилі 425(405-430) нм.



Вимоги до проби

  1. Сироватка чи плазма (ЕДТО) крові. Кров досліджують після 12-ти годинного голодування. Стабільність до 1 тижня при температурі від +2 до +10°С.
  2. При концентрації тригліцеридів ≥ 3,5 ммоль/л, сироватку розводять фізіологічним розчином в співвідношенні 1:1. Результат перемножують на 2.

Принцип методу

Тригліцериди екстрагуються ізопропіловим спиртом з рівночасним осадженням фосфоліпідів адсорбентом. Тригліцериди під дією гідроксиду калію гідролізуються. Гліцерин, який утворюється, окислюється в формальдегід метапіриодатом натрію. Формальдегід з ацетоном і амонієвими іонами утворює 3,5-діацетил-1,4-дигідролутидин, інтенсивність забарвлення якого пропорційна вмісту тригліцеридів.

Проведення аналізу

Компоненти Напівмакроаналіз
Д К X
Сироватка крові Калібрувальний розчин Дистильована вода Ізопропіловий спирт 0,10 - - 4,00 - 0,10 - 4,00 - - 0,10 4,00
Ретельно перемішують проби скляною паличкою
Адсорбент 0,4 г 0,4 г 0,4 г
Перемішують і струшують протягом 10-15 хв. Центрифугують 5 хв (3000 об/хв). Беруть сухі пробірки для подальшого аналізу
Центрифугат Гідроксид калію 2,00 0,50 2,00 0,50 2,00 0,50
Перемішують і інкубують 10 хв при + 60°С. Охолоджують 5 хв в проточній воді
Окислювач 0,50 0,50 0,50
Витримують 10 хв при кімнатній температурі
Ацетилацетон 0,50 0,50 0,50
Перемішують і інкубують точно 30 хв при + 60°С. Після охолодження змірюють оптичну густину калібрувальної і дослідної пробипроти холостої. Стабільність забарвлення 2 години

 

 

Розрахунок

Вміст тригліцеридів розраховують за формулою: Р

 



, (2,3 ммоль/л).

 

Норма:

0,45 - 1,86 ммоль/л

Застережні заходи

1. Розчин гідроксиду калію - їдка речовина. Ізопропіловий спирт - горюча речовина.

2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом, у всіх випадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.

Література

Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторнадіагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».

 

ІНСТРУКЦІЯ


Просмотров 1029

Эта страница нарушает авторские права




allrefrs.ru - 2021 год. Все права принадлежат их авторам!