Главная Обратная связь Поможем написать вашу работу!
Дисциплины:
Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)
По реакції з нітрофенілфосфатом
|
Поможем в написании учебной работы
|
Призначення
Набір застосовують для визначення вмісту кислої фосфотази в сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці. Кількість визначень: макро - 50, напівмакро - 100, мікро - 200. Набір призначений для використання ін вітро.
Обладнання
1. Мірна колба ємністю 100 мл. Пробірки 10 мл (ГОСТ 1770-74).
2. Піпетки ємністю: 5,0, 2,0, 0,1 мл (ГОСТ 29227-91).
3. Термостатичне обладнання, для підтримування температури + 37 °С
4. Фотометричне обладнання, кювети: 10, 5, З мм. Довжина хвилі 405(400-410) нм.
Вимоги до проби
1. Сироватка без гемолізу чи плазма (без цитрату, оксалату, фториду) крові. Швидко відділена від формених елементів. Аналізують свіжий зразок.
2. При оптичній густині дослідної проби > 0,5, сироватку розводять фізіологічним розчином, а отриманий результат перемножують на коефіцієнт розведення.
Принцип методу
Кисла фосфатаза каталізує гідроліз n-нітрофенілфосфату з утворенням фосфорної кислоти та n-нітрофенолу, зміна інтенсивності забарвлення якого, пропорційна активності ферменту. Активність простатичної фракції ферменту блокується тартратом.
Проведення аналізу
| Компоненти | Макро | Напівмакро | Мікро | |||||||
| Да | Дб | X | Да | Дб | X | Да | Дб | X | ||
| Реагент № 1 Реагент № 2 Сироватка | 1,0 - 0,2 | - 1,0 0,2 | 1,0 - - | - 0,5 0,1 | - 0,5 0,1 | 0,5 - - | 0,025 - 0,05 | - 0,025 0,05 | 0,025 - - | |
| Проби перемішують і інкубують точно 30 хв при + 37,0°С | ||||||||||
| Гідроксид натрію Сироватка | 4,0 - | 4,0 - | 4,0 0,2 | 2,0 - | 2,0 - | 2,0 0,1 | 1,0 - | 1,0 - | 1,0 0,05 | |
| Перемішують. Вимірюють оптичну густину дослідних проб і холостої проби проти дистильованої води. Забарвлення проб стійке більш ніж 2 години. | ||||||||||
Розрахунок
Активність загальної кислої фосфатази розраховують за формулою: Е1 = ЕА-Ехол
Активність тартратстійкої фосфатази розраховують за формулою: Е2 = ЕБ - Ехол
Активність тартратлабільної фосфатази розраховують за формулою: Е3 = Е1-Е2, де
ЕА - оптична густина дослідної проби ДА,
ЕБ - оптична густина дослідної проби ДБ.
Норма
загальної - 67-167 нмоль/(с*л) тартратлабільної-(0-16,7) нмоль/(с*л)
Застережні заходи
1.Калібрувальний розчин, буферний розчин, розчини тартрату, розчин субстрату (азид натрію) - отруйні речовини. Гідроксид натрію - їдка речовина.
2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом, увипадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.
Література
Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторна діагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».
ІНСТРУКЦІЯ
Для визначення білкових фракцій в сироватці крові турбідиметричним методом
Призначення
Набір застосовують для визначення білкових фракцій в сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці.
Кількість визначень: макро - 20, напівмакро - 40. Набір призначений для використання ін вітро.
Обладнання
Пробірки ємністю 10 мл (ГОСТ 1770-74). Піпетки ємністю: 5,0, 1,0 мл (ГОСТ 29227-91). Фотометричне обладнання, кювети: 10, 5 мм.
Довжина хвилі (590-670) нм.
Вимоги до проби
Сироватка крові без гемолізу та ліпімії. Стабільність 72 год при температурі від + 2°С до + 10°С.
Принцип методу
Фосфатні розчини відповідної концентрації осаджують білки сироватки: альбумін, α1-глобуліни, α2-глобуліни, (β-глобуліни, γ-глобуліни. Ступінь помутніння залежить від концентрації білків, які визначають турбідиметрично.
Проведення аналізу
| Компоненти | Х | ||||||
| Дистильована вода Буферний розчин"0"Сироватка | 5,0 - - | 0,75 3,75 0,50 | - - - | - - - | - - - | - - - | - - - |
| Ретельно перемішують вміст пробірки "0" запобігаючи утворення повітряних бульбашок. Отриману суміш додають в інші пробірки | |||||||
| Отримана суміш Буферні розчини | 0,5 - | - - | 0,5 5,0 | 0,5 5,0 | 0,5 5,0 | 0,5 5,0 | 0,5 5,0 |
| Перемішують і витримують 15 хв при кімнатній температурі. Перед фотометруванням вміст пробірок ще раз ретельно перемішують, піднімаючи осад. Вимірюють дослідні проби проти холостої проби. |
Розрахунок
Вміст альбуміну розраховують за формулою: Сальбумін = Е1 – Е2
Вміст α1-глобулінів розраховують за формулою: Сα1 = Е2 - Е3
Вміст α2-глобулінів розраховують за формулою: Сα2 = Е3 - Е4
Вміст β-глобулінів розраховують за формулою: Сβ = Е4 - Е5
Вміст γ -глобулінів розраховують за формулою: Сγ = Е5
Вміст загального білку розраховують за формулою:Сзаг.=(Сальбумін + Сα1 + Сα2 + Сβ + Сγ)
Розраховують вміст кожної фракції в відсотках (%) або в абсолютних одиницях (г/л) по математичній пропорції:
Сзаг. - 100%
Сфракції - Х
Норма
Сальбум - 56-66 %, С α1- 3-6 %, Сα2 - 7-10 %, Сβ -7-12%, Сγ - 13-19 %
Застережні заходи
1. Буферні розчини (азид натрію) - отруйні речовини.
2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом, увипадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.
Література
Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторна діагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».
ІНСТРУКЦІЯ
|
Просмотров 651 |
|
