По реакції з нітрофенілфосфатом

⇐ Предыдущая 3 4 5 6 7 8 91011 12 13 14 15 16 17 18 Следующая ⇒

Призначення

Набір застосовують для визначення вмісту кислої фосфотази в сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці. Кількість визначень: макро - 50, напівмакро - 100, мікро - 200. Набір призначений для використання ін вітро.

Обладнання

1. Мірна колба ємністю 100 мл. Пробірки 10 мл (ГОСТ 1770-74).

2. Піпетки ємністю: 5,0, 2,0, 0,1 мл (ГОСТ 29227-91).

3. Термостатичне обладнання, для підтримування температури + 37 °С

4. Фотометричне обладнання, кювети: 10, 5, З мм. Довжина хвилі 405(400-410) нм.

Вимоги до проби

1. Сироватка без гемолізу чи плазма (без цитрату, оксалату, фториду) крові. Швидко відділена від формених елементів. Аналізують свіжий зразок.

2. При оптичній густині дослідної проби > 0,5, сироватку розводять фізіологічним розчином, а отриманий результат перемножують на коефіцієнт розведення.

Принцип методу

Кисла фосфатаза каталізує гідроліз n-нітрофенілфосфату з утворенням фосфорної кислоти та n-нітрофенолу, зміна інтенсивності забарвлення якого, пропорційна активності ферменту. Активність простатичної фракції ферменту блокується тартратом.

Проведення аналізу

Компоненти	Макро	Напівмакро	Мікро
	Да	Дб	X	Да	Дб	X	Да	Дб	X
Реагент № 1 Реагент № 2 Сироватка	1,0 - 0,2	- 1,0 0,2	1,0 - -	- 0,5 0,1	- 0,5 0,1	0,5 - -	0,025 - 0,05	- 0,025 0,05	0,025 - -
Проби перемішують і інкубують точно 30 хв при + 37,0°С
Гідроксид натрію Сироватка	4,0 -	4,0 -	4,0 0,2	2,0 -	2,0 -	2,0 0,1	1,0 -	1,0 -	1,0 0,05
Перемішують. Вимірюють оптичну густину дослідних проб і холостої проби проти дистильованої води. Забарвлення проб стійке більш ніж 2 години.

Розрахунок

Активність загальної кислої фосфатази розраховують за формулою: Е₁ = Е_А-Е_хол

Активність тартратстійкої фосфатази розраховують за формулою: Е₂ = Е_Б - Е_хол

Активність тартратлабільної фосфатази розраховують за формулою: Е₃ = Е₁-Е₂, де

Е_А - оптична густина дослідної проби Д_А,

Е_Б - оптична густина дослідної проби Д_Б.

Норма

загальної - 67-167 нмоль/(с*л) тартратлабільної-(0-16,7) нмоль/(с*л)

Застережні заходи

1.Калібрувальний розчин, буферний розчин, розчини тартрату, розчин субстрату (азид натрію) - отруйні речовини. Гідроксид натрію - їдка речовина.

2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом, увипадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.

Література

Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторна діагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».

ІНСТРУКЦІЯ

Для визначення білкових фракцій в сироватці крові турбідиметричним методом

Призначення

Набір застосовують для визначення білкових фракцій в сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці.

Кількість визначень: макро - 20, напівмакро - 40. Набір призначений для використання ін вітро.

Обладнання

Пробірки ємністю 10 мл (ГОСТ 1770-74). Піпетки ємністю: 5,0, 1,0 мл (ГОСТ 29227-91). Фотометричне обладнання, кювети: 10, 5 мм.

Довжина хвилі (590-670) нм.

Вимоги до проби

Сироватка крові без гемолізу та ліпімії. Стабільність 72 год при температурі від + 2°С до + 10°С.

Принцип методу

Фосфатні розчини відповідної концентрації осаджують білки сироватки: альбумін, α₁-глобуліни, α₂-глобуліни, (β-глобуліни, γ-глобуліни. Ступінь помутніння залежить від концентрації білків, які визначають турбідиметрично.

Проведення аналізу

Компоненти	Х
Дистильована вода Буферний розчин"0"Сироватка	5,0 - -	0,75 3,75 0,50	- - -	- - -	- - -	- - -	- - -
Ретельно перемішують вміст пробірки "0" запобігаючи утворення повітряних бульбашок. Отриману суміш додають в інші пробірки
Отримана суміш Буферні розчини	0,5 -	- -	0,5 5,0	0,5 5,0	0,5 5,0	0,5 5,0	0,5 5,0
Перемішують і витримують 15 хв при кімнатній температурі. Перед фотометруванням вміст пробірок ще раз ретельно перемішують, піднімаючи осад. Вимірюють дослідні проби проти холостої проби.