Главная Обратная связь Поможем написать вашу работу!

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






Для визначення активності кислої фосфатази в сироватці крові



ІНСТРУКЦІЯ

для визначення активності аланінамінотрансферази динітрофенілгідразиновим методом (но Райтману-Френкелю)

Призначення

Набір застосовують для визначення активності аланінаміно­трансферази в сироватці крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці. Кількість визначень: макро - 120, напівмакро - 250, мікро - 500. Набір призначений для використання ін вітро.

Обладнання

1. Мірна колба ємністю 500 мл. Пробірки 10 мл (ГОСТ 1770-74).

2. Піпетки ємністю: 5,0, 1,0, 0,1 мл (ГОСТ 29227-91).

3. Термостатичне обладнання для підтримування температури + 37,0°С.

4. Фотометричне обладнання, кювети: 10, 5, 3 мм. Довжина хвилі 505 (500-560) нм.

Вимоги до проби

1. Свіжа сироватка без гемолізу, швидко відділена від формених
елементів.

2. Для патологічних сироваток (гемолізованих, хелезних, жовтушних, діабетичних), та для отримання найбільш точних результатів рекомендується відняти від оптичної густини дослідної проби, оптичну густину холостої проби, які вимірюються окремо, проти дистильованої води.

3. При концентрації ферменту > 4,2 мкмоль/(год*мл), пробу розводять фізіологічним розчином. Результат перемножують на коефіцієнт розведення.

Принцип методу

Внаслідок переамінування, яке відбувається під дією аланінаміно-трнсферази, утворюються глутамінова та піровиноградна кислоти. При додаванні 2,4-динітрофенілгідразину в лужному середовищ і утворюється забарвлений гідразон піровиноградної кислоти, забарвлення якого пропорційне активності ферменту.

Проведення аналізу

 

Компоненти Макро Напівмакро Мікро
Д X Д X Д X
Субстратно-буферний 0,50 0,50 0,20 0,20 0,10 0,10
Інкубують 5 хв при температурі +37,0°С
Сироватка 0,10 0,04 0,02
Інкубують 60 хв при температурі +37,0°С
2,4 - ДНФГ Дистилят (сироватка) 0,50 0,50 0,10 0,20 0,20 0,04 0,10 0,10 0,02
Витримують 20 хв при кімнатній температурі
Гідроксид натрію 5,00 5,00 2,00 2,00 1,00 1,00
Витримують 10 хв при кімнатній температурі. Вимірюють оптичну густину дослідної проби проти холостої проби. Забарвлення стійке протягом 1 години.

Розрахунок



Активність ферменту розраховують за калібрувальним графіком.

Застережні заходи

1. Буферний розчин, калібрувальний розчин (азид натрію); 2,4-ДНФГ - отруйні речовини. Гідроксид натрію - їдка речовина.

2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом, увипадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.

Література

Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторна діагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».

 

ІНСТРУКЦІЯ

Для визначення активностіα-амілази в сироватці і сечі

амілокластичним методом (по Каравею)

Призначення

Набір застосовують для визначення активності а-амілази в сироватці крові і сечі людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькій практиці. Кількість визначень: макро № 1- 50, макро № 2- 100. Набір призначений для використання ін вітро.

Обладнання

1. Мірна колба ємністю 50 мл. Пробірки 10 мл (ГОСТ 1770-74).



2. Піпетки ємністю: 5,0, 1,0, 0,1 мл (ГОСТ 29227-91).

3. Термостатичне обладнання для підтримування температури +37,0°С.

4. Фотометричне обладнання, кювети: 10 мм. Довжина хвилі 640(600-700) нм.

Вимоги до проби

1. Свіжа сироватка крові (не плазма). Слабкий гемоліз не заважає дослідженню.

2. Свіжа або заморожена сеча. В випадку високої гіперферментемії сечу розводять дистилятом, результат перемножують на коефіцієнт розведення.

Норма

Сироватка- 16-30 мг/(год*мл); 16-30 г/(год*л) Сеча - 28,0-160,0 мг/(год*мл); 28,0-160 г/(год*л) Показники норми встановлюють при досліді крові 20-30 улитий здорових дорослих людей в кожній лабораторії.

Принцип методу

Альфа-амілаза каналізує розщеплювання полісахариду крохмалю до декстринів і мальтози (продукти, що не дають кольорової реакції з йодом). Активність ферменту визначають по зменшенню оптичної густини розчину субстрату після його гідролізу ферментом.

Проведення аналізу

Компоненти Макро № 1 Макро № 2
Д X Д X
Субстратно-буферний 1,00 1,00 0,50 0,50
Інкубують 5 хв при + 37,0°С
Сироватка (сеча) 0,02 0,01
Інкубують 7,5 хв при + 37,0°С
Розчин йоду Сироватка (сеча) Дистильована вода 1,00   8,00 1,00 0,02 8,00 0,50   4,00 0,50 0,01 4,00
Оптичну густину дослідної і холостої проби вимірюють окремо проти дистильованої води.

Розрахунок

Величину активності ферменту знаходять за формулою:

Е х - Е д

С досліду = ---------------- • 160 г/(год*л), де

Е х

С досліду - концентрація α-амілази у дослідній пробі, 160 - коефіцієнт перерахунку на кількість крохмалю гідролізованого у дослідній рідині в об'ємі 1 літр за 1 годину інкубації (або 44,4 мг/(с*мл)),



Едослід - оптична густина дослідної проби, Ехолост - оптична густина холостої проби.

Застережні заходи

1. Буферний розчин (азид натрію); фторид калію – отруйні речовини.

2. При випадковому попаданні усередину - випити 0,5 л води; при попаданні в очі - промити проточною водою; при попаданні на шкіру - відмити теплою водою з милом, у випадках серйозного пошкодження здоров'я має надаватися медична допомога.

Література

Нормативні директивні правові документи. Клінічна лабораторна діагностика. Київ 2003. МВЦ «Медінформ».

ІНСТРУКЦІЯ

для визначення активності кислої фосфатази в сироватці крові


Просмотров 567

Эта страница нарушает авторские права




allrefrs.ru - 2021 год. Все права принадлежат их авторам!