Главная Обратная связь Поможем написать вашу работу!

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






ІV день Облік та оцінка результатів



Якщо виділена культура то: грам додатні коки з додатною каталазою містить фермент плазмокоагулазу, утворюють гемоліз на кров’яному агарі, мають лецитиназну активність , розщеплюють маніт- це дозволяє диференціювати золотисті стафілококи ( S. aureus) від стафілококів інших видів.

 

БІОЛОГІЧНА ПРОБА:

Беруть кроля, збоку або на спині вискубують шерсть і вводять внутрішньошкірно 0,2 мл двомільярдної засіви стафілококової культури в ізотонічному розчині NaCl. При наявності у виділеній культурі некротичних властивостей на місці введення утворюється інфільтрат і некроз. Реакцію враховують через 18-24год

МОРФОЛОГІЯ СТРЕПТОКОКА: грам додатні, сферична, овальна, шаровидна форми, розташовуються ланцюжками (діляться в одній площині), спор не утворюють, капсули не мають (деякі штами мають мікрокапсулу), нерухливі (джгутиків не мають).

КУЛЬТИВУВАННЯ:факультативні анаероби, температура росту - 37°С, рН середовища - 7,2 - 7,8, вибагливі до живильних середовищ:

Ростуть на: кров'яному агарі, сироватковому агарі, бульйоні Мартена;

- У рідких живильних середовищах(цукровий бульйон, бульйон Мартена) стрептококи ростуть на дні або на стінках пробірки у вигляді пластівців, залишаючи бульйон прозорим;

- На щільних живильних середовищахколонії дрібні або середньої величини, напівпрозорі, мутні, плоскі, блискучі, гладкі сіруватого кольору або зовсім безколірні, які не вростають у живильне середовище і добре знімаються петлею;

- На кров'яному агаріодні стрептококи утворюють зону повного гемолізу (бета-стрептококи), інші - зону зеленого гемолізу (альфа- зеленіючі стрептококи) в результаті переходу оксигемоглобіну в метгемоглобін, інші - не змінюють середовища (гама-стрептококи);

- Гемолітичні стрептококинагадують крапельки роси сіро-білого кольору з характерним злегка піднятим центром;

- Негемолітичні стрептококине реагують з еритроцитами і в процесі свого росту не викликають змін кров'яного агару. ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА СТРЕПТОКОКА

Матеріал на дослідження Спосіб забору
Слиз із зіва Забирають стерильним ватним тампоном
Зішкріб з ураженої ділянки шкіри при рожі, стрептодермії  
Гнійні виділення при ураженні шкірних покровів При відкритих процесах забирають стерильним ватним тампоном. При закритих процесах забирають стерильним шприцом
Кров при підозрі на сепсис Беруть стерильним шприцом 10-15 мл з ліктьової вени
Сеча при нефриті Збирають в стерильну посудину, краще катетером

 



 

ХІД ДОСЛІДЖЕННЯ:

І ДЕНЬ

- посів досліджуваного матеріалу на живильні середовища

- виготовлення мазків-препаратів з досліджуваного матеріалу та зафарбовування їх за Грамом.

Дослідний матеріал Методи дослідження
Слиз
  1. Проводять посів на 5% кров’яний агар, втираючи тампоном у поверхню поживного середовища.
  2. Після посіву на щільне середовище, посів здійснюють на бульйон з глюкозою.
  3. Всі пробірки та чашки ставлять в термостат на 18-24 год. при температурі 37оС.
Гній
  1. краплю гною наносять на 5% кров’яний агар в чашки Петрі і скляним шпателем втирають в середовище та інкубують в термостаті 18-24год.
  2. З гною роблять мазок, зафарбовують за Грамом і мікроскопують.
Сеча
  1. Сечу центрифугують, осад засівають на 5% кров’яний агар і ставлять в термостат на 18-24 год. При температурі 37оС.
  2. З осадом роблять мазок і зафарбовують за Грамом та мікроскопують.
Кров 1. Засівають у бульйон з 0,25 % глюкозою та в середовище Кітта-Тароцці у відношенні 1:10

ІІ день



- виймають чашки з термостата;

- оглядають ріст;

- виділяють чисту культуру, шляхом пересіву на скісний агар.

NB! Гемолітичний стрептококи викликають лізис еритроцитів з утворенням навколо колоній прозорої зони ( повного просвітлення середовища)

Колонії набувають наступного виду:

А) мукоїдні – d-1,5-2,5 мм, правильна кругла форма, блискуча поверхня, нагадують «крапельки роси» ( характерна ознака для капсульних, свіжовиділених штамів біогенних стрептококів групи А)

Б) шорсткуваті – d-1,5-2,5 мм, кругла форма, сіро-білого кольору з характерним, трохи піднятим центром. Даний вид колоній характерний для свіжовиділених штамів, які мають М – протеїн.

В) гладкі, дрібні– d-1-1,5 мм, колонії сферичної форми з рівними краями і блискучою вологою поверхнею. Даний тип колоній характерний для слабо вірулентних і авірулентних штамів піогенних стрептококів та ентерококів.

Не гемолітичні стрептококи не реагують з еритроцитами і в процесі свого росту не викликають змін кров’яного агару.

1. з частинки підозрілої колонії готують мазки препарати, фарбують за Грамом і мікроскопують ( у мазку стрептококи розміщують парами, ланцюжками, скупченнями).

2. Другу частину колонії, що залишалися в чашці Петрі пересівають на скісний агар з сироваткою для виділення чистої культури і на бульйон з кров’ю у пробірках.

До кінця дня 5-6 годинну бульйонну або агарову культуру пересівають на бульйон Мартера з 0,25% глюкозою для визначення серологічної групи в реакції преципітації за Ленсфільд.

Пробірки і флакони ставлять в термостат на 18-24 год при температурі 37оС.

ІІІ день.

1. виймають посіви з термостата і оглядають ріст.



2. Перевіряють чистоту культури на скошеному агарі.

3. Роблять мазки, зафарбовують за Грамом і мікроскопують.

4. Ідентифікують чисту культуру:

А)Проводять посів на середовище Гіса з вуглеводами для виявлення цукролітичних властивостей.

Б) Проводять посів чистої культури в молоко, желатин, 40% жовч-для виявлення цукррлітичних властивостей.

NB!Пробірки поміщають в термостат на 18-24 год при t-37оС.

В) Оглядають бульйон Мартена. Якщо є специфічний ріст (придонно- пристінковий ріст з утворенням дрібного крихтоподібного осаду і прозорим середовищем: зернистий утворює довгі ланцюжки), проводять реакцію преципітації за Ленсфільд для визначення серологічної групи.

Постановка реакції:

Виготовлення групоспецифічних антигенів:

1. Добову культуру, що виросла на бульйоні Мартена, розливають у декілька цетрифужних пробірок.

2. Центрифугують упродовж 10-15 хв при 3 тис. об/хв..

3. Над осадову рідину зливають у банку з дезінфікуючим розчином, а осад заливають стерильним фізіологічним розчином і знову центрифугують 30 хв при 3 тис об/хв..

4. До осаду, зібраного з усіх центрифужних пробірок, додають 0,06 ммоль/л соляної кислоти, виготовленої на 0,85% розчині хлориду натрію, з розрахунку: 0,5 розчину на 10-11 мікробних клітин ( число мікробних клітин визначають за оптичним стандартом мутності).

5. Пробірку поміщають на водяну баню і кип’ятять 15 хв, періодично струшуючи.

6. Отриману завісину знову центрифугують. Антиген при цьому екстрагується у над осадову рідину, яку зливають у чисту пробірку і нейтралізують 1 моль/л розчином гідроксиду натрію до рН 7,0-7,2.

7. Додають індикатор бром тимоловий синій (0,01 мл 0,04% розчину). Під час нейтралізації екстракт із солом’яно-жовтого стає оливково-зелений.

8. Центрифугують, щоб осад звільнився від лугу.

9. Готові екстракти зберігають у холодильнику. При даній реакції колір може змінюватись від оливково-зеленого до голубого.

 

Хід реакції.

1. В 5 центрифужних пробірок розливають по 0,5 мл анти стрептококових групових сироваток, які готують імунізацією кролів.

2. У першу пробірку вносять сироватку А, в другу – В, в третю – сироватку С, в четверту – сироватку Д, в п’яту – фізіологічний розчин ( контроль).

3. Пастерівською піпеткою в усі пробірки по стінці обережно нашаровують отриманий екстракт (антиген).

Висновок: при додатній реакції у пробірці з гомологічною сироваткою на межі екстракту з сироваткою утворюється тонке молочно-біле кільце ( взаємодія групоспецифічної анти стрептококової сироватки).


Просмотров 374

Эта страница нарушает авторские права




allrefrs.ru - 2021 год. Все права принадлежат их авторам!