![]() Главная Обратная связь Поможем написать вашу работу! ![]() Дисциплины:
Архитектура (936) ![]() |
![]() ІV день Облік та оцінка результатів
Якщо виділена культура то: грам додатні коки з додатною каталазою містить фермент плазмокоагулазу, утворюють гемоліз на кров’яному агарі, мають лецитиназну активність , розщеплюють маніт- це дозволяє диференціювати золотисті стафілококи ( S. aureus) від стафілококів інших видів.
БІОЛОГІЧНА ПРОБА: Беруть кроля, збоку або на спині вискубують шерсть і вводять внутрішньошкірно 0,2 мл двомільярдної засіви стафілококової культури в ізотонічному розчині NaCl. При наявності у виділеній культурі некротичних властивостей на місці введення утворюється інфільтрат і некроз. Реакцію враховують через 18-24год МОРФОЛОГІЯ СТРЕПТОКОКА: грам додатні, сферична, овальна, шаровидна форми, розташовуються ланцюжками (діляться в одній площині), спор не утворюють, капсули не мають (деякі штами мають мікрокапсулу), нерухливі (джгутиків не мають). КУЛЬТИВУВАННЯ:факультативні анаероби, температура росту - 37°С, рН середовища - 7,2 - 7,8, вибагливі до живильних середовищ: Ростуть на: кров'яному агарі, сироватковому агарі, бульйоні Мартена; - У рідких живильних середовищах(цукровий бульйон, бульйон Мартена) стрептококи ростуть на дні або на стінках пробірки у вигляді пластівців, залишаючи бульйон прозорим; - На щільних живильних середовищахколонії дрібні або середньої величини, напівпрозорі, мутні, плоскі, блискучі, гладкі сіруватого кольору або зовсім безколірні, які не вростають у живильне середовище і добре знімаються петлею; - На кров'яному агаріодні стрептококи утворюють зону повного гемолізу (бета-стрептококи), інші - зону зеленого гемолізу (альфа- зеленіючі стрептококи) в результаті переходу оксигемоглобіну в метгемоглобін, інші - не змінюють середовища (гама-стрептококи); - Гемолітичні стрептококинагадують крапельки роси сіро-білого кольору з характерним злегка піднятим центром; - Негемолітичні стрептококине реагують з еритроцитами і в процесі свого росту не викликають змін кров'яного агару. ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА СТРЕПТОКОКА
ХІД ДОСЛІДЖЕННЯ: І ДЕНЬ - посів досліджуваного матеріалу на живильні середовища - виготовлення мазків-препаратів з досліджуваного матеріалу та зафарбовування їх за Грамом.
ІІ день - виймають чашки з термостата; - оглядають ріст; - виділяють чисту культуру, шляхом пересіву на скісний агар. NB! Гемолітичний стрептококи викликають лізис еритроцитів з утворенням навколо колоній прозорої зони ( повного просвітлення середовища) Колонії набувають наступного виду: А) мукоїдні – d-1,5-2,5 мм, правильна кругла форма, блискуча поверхня, нагадують «крапельки роси» ( характерна ознака для капсульних, свіжовиділених штамів біогенних стрептококів групи А) Б) шорсткуваті – d-1,5-2,5 мм, кругла форма, сіро-білого кольору з характерним, трохи піднятим центром. Даний вид колоній характерний для свіжовиділених штамів, які мають М – протеїн. В) гладкі, дрібні– d-1-1,5 мм, колонії сферичної форми з рівними краями і блискучою вологою поверхнею. Даний тип колоній характерний для слабо вірулентних і авірулентних штамів піогенних стрептококів та ентерококів. Не гемолітичні стрептококи не реагують з еритроцитами і в процесі свого росту не викликають змін кров’яного агару. 1. з частинки підозрілої колонії готують мазки препарати, фарбують за Грамом і мікроскопують ( у мазку стрептококи розміщують парами, ланцюжками, скупченнями). 2. Другу частину колонії, що залишалися в чашці Петрі пересівають на скісний агар з сироваткою для виділення чистої культури і на бульйон з кров’ю у пробірках. До кінця дня 5-6 годинну бульйонну або агарову культуру пересівають на бульйон Мартера з 0,25% глюкозою для визначення серологічної групи в реакції преципітації за Ленсфільд. Пробірки і флакони ставлять в термостат на 18-24 год при температурі 37оС. ІІІ день. 1. виймають посіви з термостата і оглядають ріст. 2. Перевіряють чистоту культури на скошеному агарі. 3. Роблять мазки, зафарбовують за Грамом і мікроскопують. 4. Ідентифікують чисту культуру: А)Проводять посів на середовище Гіса з вуглеводами для виявлення цукролітичних властивостей. Б) Проводять посів чистої культури в молоко, желатин, 40% жовч-для виявлення цукррлітичних властивостей. NB!Пробірки поміщають в термостат на 18-24 год при t-37оС. В) Оглядають бульйон Мартена. Якщо є специфічний ріст (придонно- пристінковий ріст з утворенням дрібного крихтоподібного осаду і прозорим середовищем: зернистий утворює довгі ланцюжки), проводять реакцію преципітації за Ленсфільд для визначення серологічної групи. Постановка реакції: Виготовлення групоспецифічних антигенів: 1. Добову культуру, що виросла на бульйоні Мартена, розливають у декілька цетрифужних пробірок. 2. Центрифугують упродовж 10-15 хв при 3 тис. об/хв.. 3. Над осадову рідину зливають у банку з дезінфікуючим розчином, а осад заливають стерильним фізіологічним розчином і знову центрифугують 30 хв при 3 тис об/хв.. 4. До осаду, зібраного з усіх центрифужних пробірок, додають 0,06 ммоль/л соляної кислоти, виготовленої на 0,85% розчині хлориду натрію, з розрахунку: 0,5 розчину на 10-11 мікробних клітин ( число мікробних клітин визначають за оптичним стандартом мутності). ![]() 5. Пробірку поміщають на водяну баню і кип’ятять 15 хв, періодично струшуючи. 6. Отриману завісину знову центрифугують. Антиген при цьому екстрагується у над осадову рідину, яку зливають у чисту пробірку і нейтралізують 1 моль/л розчином гідроксиду натрію до рН 7,0-7,2. 7. Додають індикатор бром тимоловий синій (0,01 мл 0,04% розчину). Під час нейтралізації екстракт із солом’яно-жовтого стає оливково-зелений. 8. Центрифугують, щоб осад звільнився від лугу. 9. Готові екстракти зберігають у холодильнику. При даній реакції колір може змінюватись від оливково-зеленого до голубого.
Хід реакції. 1. В 5 центрифужних пробірок розливають по 0,5 мл анти стрептококових групових сироваток, які готують імунізацією кролів. 2. У першу пробірку вносять сироватку А, в другу – В, в третю – сироватку С, в четверту – сироватку Д, в п’яту – фізіологічний розчин ( контроль). 3. Пастерівською піпеткою в усі пробірки по стінці обережно нашаровують отриманий екстракт (антиген). Висновок: при додатній реакції у пробірці з гомологічною сироваткою на межі екстракту з сироваткою утворюється тонке молочно-біле кільце ( взаємодія групоспецифічної анти стрептококової сироватки). Доверь свою работу кандидату наук!
![]() |