САМОСТІЙНА ПОЗААУДИТОРНА РОБОТА

ЗАНЯТТЯ 26

Інструкція до практичного заняття № 26

Тема: « Кумарини і хромони.

Вивчення зразків гербаріїв ЛР, ЛРС та іншого наочного матеріалу. Макроскопічний аналіз одного з видів ЛРС. Якісна реакція на кумарини. Відбір середньої проби одного з видів ЛРС.»

Дисципліна: «Фармакогнозія»

Кількість годин: 4 години

Спеціальність: 5.12020101«Фармація.»

АКТУАЛЬНІСТЬ:Кумарини — це природні сполуки, в основі яких лежить бензо-a-пірон (лактон цис-орто-оксикоричної кислоти). Хромни, на відміну від кумаринів, є похідними бензо-g-пірону. У природі вони зустрічаються переважно у вигляді похідних окси-, метоксикумаринів та хромонів, а також фурохромонів у вільному стані, рідше — у формі глікозидів. Кумарини поширені в рослинах родин селерові, бобові, рутові. Вони проявляють антикоагулянтну, фотодинамічну, спазмолітичну та судинорозширювальну дію. Знання та вміння, отримані студентами при вивченні цієї теми, будуть корисними призасвоєнні деяких розділів фармакології, фітотерапії, а також в їх професійній діяльності.

Фізико-хімічні властивості. Кумарини, фурокумарини і хромони — це кристалічні, безбарвні запашні речовини, роз­чинні в органічних розчинниках і нерозчинні у воді.

Глікози­ди, навпаки, розчиняються у воді і практично не розчиняють­ся в органічних розчинниках. Кумарини і хромони флюорее-ціюють в УФ-світлі. їх легко відрізнити за допомогою діазоре-акції: хромони не утворюють забарвлених сполук, які харак­терні для кумаринів.

Якісне визначення кумаринів і хромонів описано у главі Біологічні властивості.

Кумарини і хромони мають ши­рокий спектр фармакологічної дії. Вони спричиняють спазмо­літичну, антикоагулювальну, коронарнорозширювальну, ан­тибактеріальну, Р-вітамінну й протипухлинну активність.

кумарини – природні сполуки, в основі яких лежить бензо-a-пірон (лактон цис-о-оксикоричної кислоти). Хромони, на відміну від кумаринів, є похідними бензо-g-пірону. В природі вони частіше зустрічаються у вигляді похідних окси-, метоксикумаринів та хромонів, а також фурокумаринів і фурохромонів у вільному стані, рідше у формі глікозидів.

Актуалізація опорних знань

• Дайте визначення поняття «кумарини» і «хромони» як груп біологічно активних речовин. Наведіть фізико-хімічні властивості.

• Назвіть ЛРС, що містить кумарини і хромони.

• Напишіть українською і латинською мовами назву ЛРС, ЛР і родин з теми.

• Дайте характеристику рослин, сировини, хімічного скла­ду та застосування сировини, що містить кумарини і хромони.

• Яку роль відіграють кумарини і хромони для рослин?

• Назвіть ботанічні назви родини, що містять кумарини.

• Як класифікують кумарини і хромони?

• При яких захворюваннях застосовують препарати, що містять кумарини?

• У чому полягають особливості заготівлі, сушіння та збе­рігання сировини, що містить кумарини і хромони?

• Наведіть приклади різних домішок у сировині буркуну жовтого, аммі зубної (віснаги морквоподібної).

• Назвіть ознаки, які мають діагностичне значення при мікроскопії листків буркуну жовтого.

• Назвіть способи використання сировини, що містить ку­марини і хромони.

Організація практичної роботи студентів

Студент повинен знати: загальну характеритику кума­ринів і хромонів, характеристику рослин і ЛРС, що містить ку­марини і хромони; назву ЛРС, ЛР і родини українською та ла­тинською мовами; методику проведення макроскопічного, мікроскопічного і товарознавчого аналізів.

Студент повинен уміти:

— визначати ідентичність ЛР на живих зразках, гербарі­ях, таблицях і відрізняти їх від морфологічно подібних видів;

— визначати ідентичність ЛРС, що містить кумарини і хро­мони за макрооознаками;

— готувати тимчасові мікропрепарати й проводити мікрос­копічний аналіз на підтвердження ідентичності ЛРС;

— виявляти в ЛРС кумарини за допомогою якісних ре­акцій;

— проводити ТА.

Оснащення практичних занять:

— гербарії, таблиці, зразки ЛРС: буркуну жовтого, гірко­каштану звичайного, кропу запашного, пастернака посівного, смоковниці звичайної, віснаги морквоподібної (аммі зубної); лікарські препарати;

— мікроскопи, лупи, пінцети, препарувальні голки, пред­метні і покривні скельця, серветки, смужки фільтрувального паперу, колби або пробірки, пробіркотримачі;

— реактиви: 3—5 % розчин натрію гідроксиду, розчин гліцерину, 95 % спирт,

— 10 % розчин калію гідроксиду;

— зразки ЛРС для проведення ТА (сировина в поліетиле­нових пакетах або паперових мішках);

— ваги, рівноваги, клейонка, лінійки.

КОНТРОЛЬНІ ПИТАННЯ

1. Особливості хімічної будови кумаринів та хромонів, їх класифікація.

2. Охарактеризуйте фізичні та хімічні властивості кумаринів та хромонів.

3. Методи виділення кумаринів з рослинної сировини.

4. Основні якісні реакції виявлення кумаринів.

5. Методи кількісного визначення кумаринів і хромонів у ЛРС згідно НТД, основні етапи, їх суть.

6. Зв'язок хімічної будови кумаринів та фурохромонів з їх біологічною активністю.

7. Хімічна структура кумарину, фурокумарину, піранокумарину, хромону, фуранохромону та їх похідних: умбелліферону, бергаптену, келіну, ескулетину, віснагіну, дигідросамідину.

8. Лікарські препарати, що вміщують кумарини і хромони.

САМОСТІЙНА АУДИТОРНА РОБОТА

Виконати лабораторні роботи:

ЗАВДАННЯ 1. Визначити тотожність та доброякісність ЛРС, що вміщує кумарини та фурохромони за зовнішніми ознаками.

Об'єкти аналізу: насіння каштану кінського, плоди пастернаку посівного, амі велика; трава буркуну лікарського, листя смоківниці звичайної.

Методичні вказівки: проведіть вивчення зовнішніх ознак ЛРС, опишіть їх в протоколі, визначте тотожність ЛРС за визначником. У висновку напишіть латинські назви ЛРС, рослини та родини. Відмітьте відповідність сировини вимогам АНД.

ЗАВДАННЯ 2. Приготувати витяжку з рослинної сировини та провести якісні реакціі виявлення кумаринів та хромонів на зразках сировини .

Приготування витяжки з ЛРС, що вміщує кумарини:

Наважку подрібненої сировини (3,0) поміщають в колбу зі шліфом на 100 мл, заливають 15 мл 95% спирту, колбу з'єднують зі зворотнім холодильником і кип'ятять на водяному огрівнику протягом 20 хв. Після охолодження витяжку профільтровують. Одержана витяжка використовують для проведення реакцій та хроматографічних досліджень на наявність кумаринів.

Якісні реакції: до 3-5 мл спиртової витяжки додають 5 крапель 5% розчину натрію гідроксиду і нагрівають на водяному огрівнику 5-7 хв. Відмічають зміну забарвлення (при наявності кумаринів розчин жовтіє).

а) лактонна проба: 1 мл підлужненої витяжки розводять чотирикратною кількістю води, суміш нейтралізують 20% розчином кислоти сульфатної. Який продукт утворюється при наявності кумаринів? Що відбувається в ході реакції? Напишіть схему реакції.

б) реакції утворення азобарвників:

1. до 1 мл підлужненої витяжки додають 3-5 крапель свіжоприготованого розчину п-нітроаніліну (до 1 мл 0,1н. хлористоводневої кислоти додають 1 мл 5% розчину натрію нітриту і 0,5 мл цього розчину змішують з 1 мл 0,5% розчину п-нітроаніліну). Що спостерігають в результаті реакції? Напишіть схему реакції.

2. до 1 мл підлужненої витяжки додають 3-5 крапель свіжоприготованого розчину діазотованої кислоти сульфанілової (до 1 мл 0,1н хлористоводневої кислоти додають 1 мл 5% розчину натрію нітриту і 0,5 мл цього розчину змішують з 10 мл 0,1% розчину кислоти сульфанілової. Відмічають зміну забарвлення.

в) реакція з калію гідроксидом на ЛРС, що вміщує хромони:

до 1,0 г подрібненої сировини додають 15 мл очищеної води і кип'ятять на водяному огрівнику 15 хв. Одержану витяжку фільтрують через вату у фарфорову чашку і випарюють. До сухого залишку додають кристалик калію гідроксиду. Відмічають результат реакції, наводять хімізм.

ЗАВДАННЯ 3. Ознайомитися із методикою виявлення кумаринів в ЛРС методом хроматографії на папері чи в тонкому шарі сорбенту.

Залишок спиртової витяжки (3-5 мл) випарюють до об'єму 0,5 мл і капіляром наносять на лінію старту хроматографічної пластинки "Силуфол" або на хроматографічний папір. Паралельно на лінію старту наносять зразки відомих кумаринів та хромонів ("свідки").

Пластинку висушують і помістіть в камеру з системою розчинників бензол-етилацетат (2:1), гексан-метанол-бензол (5:1:4) або ацетон-гексан (2:8). Після хроматографування пластинку висушують в сушильній шафі при температурі 110-1200С протягом 2-3 хв, оприскують 5% розчином натрію гідроксиду.

Хроматограму вивчають при денному та УФ-світлі до і після обробки діазотованою кислотою сульфаніловою. Відмічають характер забарвлення і флюоресценсії плям, розраховують величини Rf кумаринів і хромонів. Замальовують хроматограми, нумерують плями кумаринів. Порівнюють величини Rf, характер забарвлення і флюоресценсії плям досліджуваного витягу та "свідків". Ідентифікують компоненти досліджуваної витяжки і роблять висновок про якісний склад кумаринів.

Примітка. Кумарини в УФ-світлі мають блакитну, синю, фіолетову, зелену флюоресценсію, яка після обробки лугом підсилюється. Після оприскування хроматограм діазореактивом плями набувають забарвлення від цегляно-червоного до фіолетового, яке можна побачити при денному світлі.

ЛІТЕРАТУРА

Основна:

1. Ковальов В.М., Павлій О.I., Ісакова Т.І. Фармакогнозія з основами біохімії рослин: Підручник для студ. вищих фармац. закладів освіти та фармац. факультетів вищих мед. закладів освіти ІІІ- Іv рівнів акредитації / За ред. В.М. Ковальова. – Х.: Прапор; Вид-во НФаУ, 2000,—С 190 – 212.

2. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа Лекарственное растительное сырье/ МЗ СССР. — XI изд., доп. — М.: Медицина, — 1989. — С 280 – 281.

3. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид. –Х.: РІРЕГ, 2001. – С 13 -14.

4. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид.– Доповнення 1. – Х.: Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр», 2004. – 493 с.

5. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид.– Доповнення 2. – Х.: Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр», 2008. – С. 408-409, 414-417, 443-445, 490-492, 544-546, 548-550.

6. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». — 1-е вид. — Доповнення 3. — Х.: Державне підприємство «Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів», 2009. - 280 с

7. Практикум по фармакогнозии: Учеб. пособие для студ. вузов / В.Н. Ковалев, Н.В. Попова, В.С. Кисличенко и др.; Под общ. ред. В.Н. Ковалева. – Харьков: Изд-во НФаУ: Золотые страницы: МТК-книга, 2004. – С. 97 - 114.

8. Аналіз лікарської рослинної сировини, що вміщує фенольні сполуки. Навчально-методичний посібник з фармакогнозії для студентів ІІІ курсу фармацевтичного факультету / А.Р. Грицик, М.В. Мельник, Л.М. Грицик. – Львів: ДП МВС України «Львів-Інформ-Ресурси», 2010. – 52 с.

Додаткова:

9. Лікарські рослини: Енциклопедичний довідник / За ред. академіка АН УССР А.М. Гродзінського. – К.: Голов. ред. укр. рад. енциклопедії ім. М.П. Бажана, 1992. – 544 с.

10. Машковский М.Д. Лекарственные средства. – М.: Медицина, 1986. - Т. 1. - 624 с; Т. 2. - 576 с.

11. Гаммерман А.Ф. Курс фармакогнозии. – Л.: Медицина, 1967. – 702 с.

12. Павлий А.И., Ковалев В.Н., Ковалева А.М., Попова Н.В., Журавель И.А., Ильина Т.В. Фармакогнозия : Учебное пособие. - Харьков, 1994. - 268 с.

САМОСТІЙНА ПОЗААУДИТОРНА РОБОТА

Вивчити теоретичний матеріал до теми:

Назвіть (по хімічних групах) на латинській та українській мові ЛРС, рослини та їх родини, що вміщують кумарини та фурохромони. Опишіть фенофази і методи збору ЛРС: плоди амі зубної, амі великої, пастернаку посівного, псоралеї кістянкової, кропу запашного і моркви дикої; насіння каштану, трава буркуну лікарського; плоди та листя смоковниці; кореневища та корені дягелю, здутоплідника сибірського. Вкажіть способи сушіння, первинної обробки та правила зберігання ЛРС.

Охарактеризуйте зовнішні ознаки ЛРС: плоди амі зубної, амі великої, пастернаку посівного, кропу запашного і моркви дикої; насіння каштану, трава буркуну лікарського; кореневища та корені дягелю, здутоплідника сибірського.

Вкажіть способи використання та застосування ЛРС в медицині та фармації.