Главная Обратная связь

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






Лабораторно-практическое занятие. «Физико-химические свойства ферментов»



«Физико-химические свойства ферментов»

Цель работы: ознакомиться с каталитической функцией ферментов, изучить основные физико-химические свойства ферментов на примере амилазы слюны.

Оборудование: штатив с пробирками, водяная баня, термометр, стеклянные палочки, предметные стекла, секундомер, термостат, химические стаканы, спиртовка, держатели для пробирок, универсальная индикаторная бумага.

Реактивы: 0,5%-ный и 1%-ный раствор крахмала, раствор Люголя, 1/15М дигидрофосфат калия, 1/15М гидрофосфат натрия, 1% раствор сахарозы, 10%-ный раствор гидроксида натрия, 1%-ный раствор сульфата меди, дистиллированная вода, 1%-ный раствор хлорида натрия, йод в иодиде калия, раствора ляписа АgNO3, конц. уксусная и азотная кислоты, 3%-ный раствор хлорида железа (III) FeCl3, конц. раствор гидроксида натрия или аммония, 2М раствор соляной кислоты.

Материалы: слюна.

 

Методические рекомендации к занятию

При подготовке к занятию необходимы знания об особенностях строения, классификации, физико-химических свойствах ферментов, участия ферментов в переваривании пищи. При выполнении лабораторного практикума нужны знания качественных реакций на йод, влияния температуры, рН среды, активаторов и ингибиторов на свойства ферментов.

ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ

Часть 1. Изучение физико-химических свойств ферментов на примере амилазы слюны

1. Влияние температуры на активность ферментов.

2. Влияние рН среды на активность амилазы слюны.

3. Специфичность ферментов.

1. Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов.

Часть 2. Исследование химического состава слюны

1. Обнаружение анионов неорганических кислот.

2. Обнаружение муцина и изучение его природы.

Часть 1. Изучение физико-химических свойств ферментов на примере амилазы слюны

Будучи по своей химической природе белками, ферменты обладают всеми свойствами белков: термолабильностью, амфотерностью, способностью образовывать коллоидные растворы и т. д. Кроме того, им присущи характерные только для них свойства: высокая специфичность, действие при определенном значении рН среды и др.

Влияние температуры на активность ферментов

1. В 4 пробирки отмерить по 2 мл крахмала. Пробирки поместить в разные температурные условия:

а) в кипящую водяную баню 100оС

б) в термостат на 40 оС

в) оставить в штативе (комнатная температура)

г) поставить в снег.



3. Через 10 мин, когда содержимое пробирок примет заданную температуру, во все пробирки добавляют по 0,5мл разбавленной слюны, перемешивают с помощью стеклянной палочки и оставляют в тех же условиях.

4. Тотчас же начинают делать капельные пробы на стекле. Две капли содержимого второй пробирки капают на стекло, к ним добавляют 1 каплю раствора Люголя. Вначале получается синее окрашивание, через 1-2 мин. пробу повторяют до появления красно-бурой окраски.

4.Как только окраска содержимого второй пробирки окажется красно-бурой, прибавляют во все пробирки 1-2 капли раствора Люголя и отмечают время окончания ферментативной реакции.

После проведения опыта все пробирки переносятся в штатив и записывают результаты опыта.

Схема записи протокола опыта

№ пробирки Фермент амилаза, мл Объем 0,5% крахмала, мл Температура, оС Результат опыта с раствором Люголя (рисунок пробирки с полученным цветом раствора)
   
   
   
   

Влияние рН среды на активность амилазы слюны

Содержимое каждой пробирки после прибавления слюны тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре (20оС) на 15-20 мин. Через 10 мин. берут пробы из третьей пробирки, переносят на стеклышко и проделывают реакцию с каплями раствора Люголя. Вначале обычно получается синее окрашивание, затем фиолетовое, фиолетово-красное, красно-бурое, желтое. Как только содержимое третьей пробирки будет давать желтое окрашивание, через 1-2 минуты приливают во все пробирки по 1 капле раствора Люголя.

На основании полученной окраски судят о степени расщепления крахмала в зависимости от рН среды.

Схема записи протокола опыта



№ пробирки рН буферного раствора Объем растворов для получения буферного раствора с заданным рН Субстрат (крахмал) 0,5% Фермент амилаза Результат опыта с раствором Люголя (рисунок пробирки с полученным цветом раствора)
1/15М дигидрофосфата калия 1/15М гидрофосфата натрия
5,6 0,25 4,75    
6,2    
   
7,4    
4,75 0,25    

Специфичность ферментов

Принцип работы: каждый фермент может катализировать только одну реакцию, действуя на одно вещество или ряд близко родственных веществ. Высокая специфичность - одно из наиболее характерных свойств ферментов. Амилаза слюны ускоряет гидролиз только полисахаридов и не оказывает никакого действия на дисахариды. В случае расщепления сахарозы на глюкозу и фруктозу реакция Троммера должна быть положительной. При расщеплении крахмала до глюкозы эта проба также положительна.

Работа проводится с 2 пробирками по следующей схеме: в каждую из пробирок добавляют по 0,5 мл слюны, затем в 1-ю - 2 мл крахмала, во 2-ю – 2 мл сахарозы, оставляют на 10 минут.. Содержимое каждой пробирки делят на 2 части: одну часть проверяют с раствором Люголя, другую – с раствором Троммера. на присутствие глюкозы:

1 мл исследуемого раствора + 0,5 мл 10% раствора гидроксида натрия + 5 капель 1% раствора сульфата меди.

Пробирку нагревают в кипящей водяной бане. При наличии глюкозы появляется желтое окрашивание, переходящее в красное.

 


Эта страница нарушает авторские права

allrefrs.ru - 2019 год. Все права принадлежат их авторам!