Главная Обратная связь

Дисциплины:

Архитектура (936)
Биология (6393)
География (744)
История (25)
Компьютеры (1497)
Кулинария (2184)
Культура (3938)
Литература (5778)
Математика (5918)
Медицина (9278)
Механика (2776)
Образование (13883)
Политика (26404)
Правоведение (321)
Психология (56518)
Религия (1833)
Социология (23400)
Спорт (2350)
Строительство (17942)
Технология (5741)
Транспорт (14634)
Физика (1043)
Философия (440)
Финансы (17336)
Химия (4931)
Экология (6055)
Экономика (9200)
Электроника (7621)






Иммобилизация мицелия гриба в колбах на круговой качалке



Для проведения экспериментов по иммобилизации были выбраны субстраты, которые по литературным данным являются лучшими носителями:

ü губки из нержавеющей стали [Rodríguez Couto S. et al., 2004],

ü растительная губка люфа [Iqbal M. et al., 2005].

Кроме того, для испытаний в качестве носителя для иммобилизации мицелия были выбраны следующие лигноцеллюлозные материалы:

ü дубовые опилки, как показавшие наибольшую способность интенсифицировать синтез лакказы;

ü сосновые стружки, как доступный отход деревоперерабатывающей промышленности;

ü костра льна, как доступный отход льноперерабатывающей промышленности.

Губки из нержавеющей стали были порезаны на кусочки диаметром приблизительно 1,5 см. Перед использованием носитель был подвержен кипячению в течение 10 мин, а затем трижды промыт дистиллированной водой.

Люфа была порезана на диски диаметром 2,5 см и толщиной 2-3 мм. Перед использованием носитель был подвержен кипячению в течение 30 мин, а затем трижды промыт водой.

Остальные носители (дубовые опилки, сосновые стружки, костра льна) использовали в исходном виде, без дополнительной обработки.

Все выбранные носители были подвержены стерилизации в автоклаве при температуре 121 ºС в течение 20 мин.

Поскольку целью исследования было получение исходных данных и разработка экспериментальной установки для биодеградации ксенобиотиков, одной из важнейших характеристик которой является объем, носители испытывали в эквивалентных по объему, а не по площади поверхности количествах.

Для проведения иммобилизации была использована методика, предложенная

Iqbal c соавторами [Iqbal M. et al., 2005 ].

Иммобилизацию продуцента осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750мл на круговой качалке. В боксе в стерильных условиях в зоне пламени горелки в колбы вносили 150 мл питательной среды, 0,5% по объему посевного материала (II пассаж, 3 суток роста) и носители в количестве 50 см3, что составляло для дубовых опилок – 2 г, костры льна – 2 г, стальных губок – 6 г, люфы – 3 г, сосновые стружек – 3 г (удельная площадь поверхности составила 96,8 см2/г ). В контрольные колбы вносили 150 мл питательной среды и 0,5% по объему посевного материала (II пассаж, 3 суток роста). Активность посевного материала составила 6,2 ЕОА.

Питательная среда имела следующий состав: мука пшеничная – 29,0 г/л; кукурузный экстракт – 6,4 г/л; NH4NO3 – 2,0 г/л; КН2РО4 – 1,3 г/л; вода водопроводная – до 1 л. Для стимулирования продуцирования лакказы в среду был добавлен CuSO4 в концентрации 0,05г/л. pH среды до стерилизации – 5,6-5,8.



Затем колбы инкубировали на круговой качалке с частотой вращения 200 об/мин при температуре 32 ºС в течение 10 суток. Опыт осуществляли в трех повторностях.

Эффективность иммобилизации оценивали по отсутствию биомассы гриба в культуральной жидкости.

В результате проведения экспериментов по иммобилизации было установлено, что наилучшим образом иммобилизация мицелия гриба Trametes hirsuta 56 качалочным способом происходит на стальных губках и растительной губке люфа рисунок 2.

 

 

Рисунок 2. Иммобилизация биомассы гриба на различных носителях: а – на растительной губке люфе; б – на стальных губках
а)

б)

 

Стальных губки и растительная губка люфа устойчивы к механическим и химическим воздействиям, изменениям температуры и pH среды, но определяющим, по-видимому, является то, что их структура обеспечивает свободный доступ водной среды к иммобилизованным клеткам гриба.

Использование дубовых опилок и костры льна в качестве носителей при иммобилизации мицелия гриба качалочным способом оказалось неэффективным, о чем свидетельствовало наличие биомассы гриба в культуральной жидкости рисунок 3, что, по-видимому, связано с отсутствием объемной структуры у этих субстратов.

а) б)

Рисунок 3. Иммобилизация биомассы гриба на: а) дубовых опилках, б) костре льна

 

В колбах с сосновыми стружками образовался плотный комок из стружек и иммобилизованного мицелия грибной культуры. В культуральной жидкости биомассы гриба не наблюдалось, что свидетельствует о том, что сосновые стружки являются хорошим носителем для иммобилизации, но способ иммобилизации на качалке для них не подходит рисунок 4.



 

 

Рисунок 4. Иммобилизация биомассы гриба на сосновых стружках


Эта страница нарушает авторские права

allrefrs.ru - 2018 год. Все права принадлежат их авторам!